Haemocytometer العد بواسطة المجهر وشريحة العد

Haemocytometer

هو الأداة المستخدمة لعد خلايا الدم (كما يوحي الاسم)وهو الأصل في عد الدم

وهو يستعمل حاليا لعد الخلايا الأخرى وكثير من أنواع الجسيمات المجهريه.

وهو يتألف من الزجاج السميك على شكل مستطيل مقسم بالمنتصف الى

حجرتين منفصلتين وكل حجرة مقسمة على شكل شبكة من المربعات يمكن

العد عليها ، وهي اربع مربعات طرفية طول ضلعها ١ مم ومربعات

٥ مم . ويوضع على هذه الشريحة غطاء زجاجي \ وسطى طول ضلعها ١

١٠ مم ، ومن ثم أمكن إحصاء عدد الخلايا في حجم معين \ مخصص لذلك ليكون ارتفاع حجرة العد ١

من السائل ، وبالتالي حساب إجمالي تركيز الخلايا في السوائل .

و للتوضيح انظر الصور الآتية

Haemocytometer مراحل العد على

١- تخفيف الدم

لكل نوع محلول تخفيف يسمى سائل العد

محلول عد كريات الدم الحمراء كلوريد الصوديوم: ٠,٦ جم وسترات الصوديوم: ١ جم

وفورمالين: ١ مل وماء مقطر: حتى ١٠٠ مل

normal saline solution or physiologic salt ومن الممكن استخدام محلول الملح الطبيعي

8.5%

المربعالطرفيلعد

كراتالدمالابیض

4 x 4

المربعالاوسطلعد

كراتالدمالاحمر

والصفائح

5 x 5

في ١٠٠٠ مل ماء مقطر NaCl ويمكن تحضيره بإذابة ٨,٥ جم

٢٠٠ : في العد الكلي لكرات الدم الحمراء نسبة التخفيف ١

أي نأخذ ١٠ ميكرولتر دم على ١٩٩٠ ميكرولتر من محلول العد

محلول عد كريات الدم البيضاء الكلي ١ % محلول جنشياتا البنفسجية ١ مل حامض خليك

ثلجي

مل ماء مقطر حتى ١٠٠ مل Glacial Acetic Acid) 1.5)

٢٠ : وفي العد الكلي لكرات الدم الأبيض نسبة التخفيف ١

أي نأخذ ٢٠ ميكرولتر دم على ٣٨٠ ميكرولتر من محلول العد

٢٠ عند استخدام محلول اوكسالات الامونيوم : وفي العد الكلي لصفائح الدم نسبة التخفيف ١

١% أي نأخذ ١٠ ميكرولتر دم على ١٩٠ ميكرولتر من محلول العد

١٠٠ أي نأخذ ١٠ ميكرولتر دم على : وعند استخدام محلول سترات الفورمالين نسبة التخفيف ١

٩٩٠ ميكرولتر من محلول العد

٢- اخذ حجم معين من الدم المخفف

٣- عد الخلايا في هذا الحجم المعين

٤- حساب العدد في ١ مل مكعب من الدم

وذلك طبقا لقانون شريحة العد

عدد الخلايا في ١ مل مكعب من الدم =

التخفيف / الحجم x عدد الخلايا المعدودة

فمثلا لو عدد الخلايا = س ، والتخفيف = ٢٠

عدد المربعات التي قمنا بعدها x الارتفاع x العرض x والحجم = طول المربع الكبير مثلا

4 x 1/10 x 1 x 1 =

٥٠ x و بالتعويض في القانون = س

ومن الآخر نفعل التالي :

نعد كرات الدم الأبيض في الأربع مربعات الطرفية ونضرب العدد في ٥٠

نعد كرات الدم الاحمر في خمس مربعات من المربعات

الوسطى ونضرب العدد في ١٠٠٠٠

نعد صفائح الدم في خمس مربعات من المربعات الوسطى

ونضرب العدد في ١٠٠٠ عند استخدام محلول اوكسالات الامونيوم

%١

١٠٠ نعد : وعند استخدام محلول سترات الفورمالين نسبة التخفيف ١

٢٥ مربع من المربعات الوسطى ونضرب العدد في ١٠٠٠ واتجاه العد

كما في الصورة المجاورة

ملاحظاتيجبأنتؤخذفيالاعتبارعنداستخدامشريحةالعد:

١- يجب التأكد من نظافة الشريحة وغطائها الزجاجي قبل الاستخدام

٢- يجب استخدام الغطاء الزجاجي المخصص لشريحة العد وذلك لأنه سميك و ثقيل بالقدر الكافي

١٠ دون زيادة او نقصان ، ولا / فنحصل عل غرفة العد المطلوبة ويكون الارتفاع ١

يستعاض عنه بالأغطية الرقيقة المستخدمة في الفحص المجهري

٣- يجب عدم حدوث فقعات هواء بعد وضع العينة على

شريحة العد ويمكن ملاحظته تحت المجهر بالعدسة 10

و إلا ستعطي نتائج خاطئة x

٤- يفضل ان يكون الضوء في المجهر خافت قليلا حتى

تظهر خلايا الدم وحدود المربعات

٥- تعد الخلايا على الضلع الأعلى و الأيسر من المربع ولا

تعد الخلايا على الضلع الأيمن و الأسفل وذلك لتجنب

تكرار عد الخلية مرة أخرى. انظر الصورة المجاورة

٦- تملأ حجرة العد بقدر محدد بحيث لا يزيد ولا يخرج

المحلول إلى الأخاديد المجاورة

٧- يجب مزج محلول العد مع العينة جيدا قبل أن يؤخذ منه

على شريحة العد و ذلك للحصول على محلول متجانس

و الالتزام التام EDTA ٨- يجب أن تؤخذ عينة الدم المراد عدها على مانع تجلط مثل الادتا

لأن بزيادتها تخفف الدم ومن ثم EDTA بقدر المادة المانعة للتجلط ١:٥٠ في % 10

تعطي نتائج غير دقيقة ولذلك يستحب تجفيف الانابيب المحتوية على محلول مانع التجلط

عند درجة حرارة مناسبة ثم استخدامها وهي جافة في جمع عينات الدم المراد عده مع

مراعاة التقليب والخلط الجيد للعينة مع مانع التجلط .

٩- تترك شريحة العد بعد ملئها بالعينة فترة زمنية مناسبة حتى تستقر الخلايا على أسطح

المربعات اقل من خمس دقائق مثلا ، و في حالة عد الصفائح الدموية يجب وضعها في جو

رطب لمدة ٢٠ دقيقة قبل العد ، مثلا : توضع في طبق بتري يحتوي على ورق ترشيح

مبلل بالماء وذلك لمنع جفاف العينة وحتى تستقر الصفائح على أسطح المربعات

١٠ – تنظف شريحة العد بعد عملية العد مباشرة بالماء المقطر وتجفف بقماش نام لتجنب حدوث

خدوش فيها .

كيفية العمل : R.B.Cs Counting ١– العدالكليلكراتالدمالحمراء

١. یخفف الدم ٢٠٠:١ في محلول التخفیف وذلك بإضافة ٢٠ میكرولیتیر دم إلى ٤ مل محلول في أنبوبة وازمان ( یمكن اخذ

١٠١ وذلك بسحب الدم حتى ٠٫٥ ثم التكملة حتى ١٠١ بمحلول – ١ – العینة بواسطة الماصة ذات الانتفاخ والمقسمة ٠٫٥

التخفیف).

٢. ترج الأنبوبة جيدا لمدة دقيقتين علي الأقل ( أو الماصة ).

٣ . تملا شريحة العد بماصة شعرية أو ماصة باستير بعد وضع غطاء الشريحة.

علي أن يدخل في العد الكريات X أو 40 X ٤. تعد كريات الدم الحمراء بواسطة العدسة الشيئية 10

التي تمس القاع والحدود الشمالية للمربعات الصغيرة في ٥ مربعات من المربع الأوسط للشريحة (

المربعات الأربعة علي الأطراف + المربع الأوسط ).

طريقةالعد:

خمس مربعات من المربع الأوسط في شريحة العد .

الحساب:

عدد كريات الدم الحمراء /مم ٣ = عدد الكريات * ١٠٠٠٠

أسبابالزيادةفيعددكرياتالدمالحمراء:

نقص الأكسجين – أمراض القلب وامراض تليف الرئتين ووجود بعض أنواع الهيموجلوبين غير

الطبيعي.

أ– أخطاءتؤديإلىزيادةالعدد

١. حجم الدم اكثر من ٢٠ ميكروليتر أو حجم المحلول اقل من الحجم المطلوب.

٢. عدم مزج العينة جيدا مع محلول التخفيف.

٣. توزيع كريات الدم الحمراء في شريحة العد غير متوازن.

٤. مل خاطئ لشريحة العد.

٥. عد جميع كريات الدم الحمراء الملامسة للخطوط الجانبية.

أسبابنقصكرياتالدمالحمراء:

أمراض الدم مثل اللوكيميا وفشل النخاع العظمي …. الخ ·

ب– أخطاءتؤديإلىنقصالعدد:

١. حجم الدم اقل من ٢٠ ميكروليتر أو حجم المحلول اكثر من الحجم المطلوب.

٢. إرجاء العد لمدة طويلة.

٣. وجود جلطة صغيرة في العينة.

٤. وجود فراغات هوائية أو شوائب.

٥. استعمال شریحة غیر نظیفة.

المعدلالمرجعي:

الفئةالنسبة–ملليمترالمكعب

٦,٥ مليون / ملليمتر المكعب – الرجال ٤,٥

٥,٨ مليون / ملليمتر المكعب – النساء ٣,٨

٤,٨ مليون / ملليمتر المكعب – أطفال ( ٣ شهور) ٣,٢

٥,٥ مليون / ملليمتر المكعب – ٦ أعوام) ٤,١ – أطفال( ٣

٥,٤ مليون / ملليمتر المكعب – ١٢ عام) ٤ – أطفال ( ١٠

يمكن حساب عدد الكرات الحمراء بقسمة الهيموجلوبين على ٣

ولكنها دقيقة في الحلات الطبيعية فقط .

Counting Total Leucocytic : ٣– العدالكليلكرياتالدمالبيضاء

Haemocytometer بواسطة المجهر وشريحة العد

محلول التخفيف يحلل كريات الدم الحمراء ويصبغ انويه كريات الدم البيضاء بلون بنفسجي فيسهل

عدها.

كيفيةالعمل:

١- يخفف الدم ٢:١ باستخدام الماصة ذات الانتفاخ المدرجة ١١ ، ١ ، ٠,٥ بملئها بالدم حتى علامة

. ٠,٥ ثم بالمحلول حتى علامة ١١

٢- يمكن عمل نفس التخفيف ٢٠ ميكروليتر إلى ٠,٣٨ مل من المحلول ( باستعمال ______________الماصة

الأوتوماتيكية ) في أنبوبة زجاجية.

٣- ترج الأنبوبة جيدا.

٤- تملا شريحة العد بواسطة ماصة باستير بعد وضع غطاء زجاجي للشريحة.

( ٥- تعد كريات الدم البيضاء في المربعات الأربعة الخارجية باستخدام العدسة الشيئية ( * ١٠

للمجهر.

الحساب:

: عدد كريات الدم البيضاء /مم ٣

٢ = عدد الكريات * ٥٠ / عدد الكريات * ١٠٠

الأخطاءالتيتؤديإلىزيادةأونقصعددكرياتالدمالبيضاء:

نفس الأسباب التي تم ذكرها عند عد كريات الدم الحمراء . لتلافي هذه الأخطاء يمكن عد عينه أخري ·

أو عدد أكبر من الكريات البيضاء.

أسبابالزيادةفيعددكرياتالدمالبيضاء:

١. زيادة فسيولوجية أثناء الحمل والولادة ، عقب مجهود عضلي وفي الأطفال حديثي الولادة

.( ٢٥٠٠٠ /مم ٣ – ١٨٠٠٠)

٢. زيادة مرضية – العدوي بالميكروبات العنقودية والسبحية مثل التهاب اللوزتين والزائدة الدودية

والتهاب حوض الكلي – الدرن.

أمراض الحساسية والجلدية والطفيليات. ·

العدوي بالفيروسات. ·

الأورام الخبيثة وسرطان الدم. ·

أسبابالنقصفيعددكرياتالدمالبيضاء:

العدوي ببعض الفيروسات. ·

فشل النخاع العظمي. ·

التيفود والباراتيفود. ·

المعدلالمرجعي:

الفئةالنسبة/ مم٣

١١,٠٠٠ / مم ٣ – البالغين ٤٠٠٠

١٨,٠٠٠ / مم ٣ – أطفال( عام ) ٦٠٠٠

١٥,٠٠٠ / مم ٣ – ٧ أعوام) ٥٠٠٠ – أطفال ( ٤

١٣,٥٠٠ / مم ٣ – ١٢ عام) ٤,٥٠٠ – أطفال (